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Regulation of the Dll1 gene during mouse embryogenesis: MSD mediated cis-regulation and identification of miRNAs.

Regulation des Dll1 Genes während der Maus Embryogenese: MSD vermittelte cis-Regulation und Identifizierung von miRNAs.

München, Technische Universität, Fakultät Wissenschaftszentrum Weihenstephan, Diss., 2011, 140 S.
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To evaluate the function of the Dll1 MSD enhancer in its endogenous context, we mutated it through homologous recombination. MSD deficient mutant mice are viable and fertile. Deletion of MSD does not dramatically change Dll1 mRNA expression. Mutant mice do show a posterior homeotic transformation of the 7th cervical segment. Mice, heterozygous for a Tbx6 loss-of-function allele, phenocopy the posterior homeotic transformation observed for MSD deficient mice. Combining Tbx6 and MSD alleles has no additive effect on the observed homeotic transformation, supporting that Tbx6 is a major factor for MSD function. We further identified miRNAs, which could regulate Dll1 expression during mouse embryogenesis. We first did an in silico interspecies comparison of the human, mouse and chicken Dll1 3´UTRs and identified conserved miRNA binding sites. We then performed a systematic whole mount in situ hybridization screen to identify miRNAs, which are spatially and temporally co-expressed with the Dll1 mRNA. Using this approach we identify seven candidate miRNAs, which overlap with Dll1 expression in vivo.
Um die endogene Funktion des Dll1 MSD Enhancers aufzuklären, haben wir ihn durch homologe Rekombination mutiert. MSD defiziente Mäuse sind lebensfähig und fruchtbar. Deletion des MSD Enhancers verändert die Dll1 mRNA Expression nicht dramatisch. MSD defiziente Mäuse zeigen eine homöotische Transformation des siebten cervikalen Wirbelkörpers. Mäuse, heterozygot für Tbx6, zeigen ebenfalls diese homöotische Transformation. Die genetische Kombination von Tbx6 und MSD Allelen hat keinen additiven Effekt auf den Phänotyp. Tbx6 ist daher ein wichtigen Transkriptionsfaktor für die MSD Funktion. Außerdem haben wir miRNAs identifiziert, welche die Dll1 Expression während der Embryogenese regulieren könnten. Dafür haben wir die Dll1 3´UTRs von Maus, Mensch und Huhn in silico miteinander verglichen und konservierte miRNA Bindestellen charakterisiert. Dann haben wir mit systematischer in situ Hybridisierung miRNAs identifiziert, welche örtlich und zeitlich mit der Dll1 mRNA co-exprimiert werden. Insgesamt haben wir so 7 miRNAs identifiziert, welche mit der Dll1 Expression überlappen.
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Publication type Other: Thesis
Thesis type Doctoral thesis
Quellenangaben Volume: , Issue: , Pages: 140 S. Article Number: , Supplement: ,
University Technische Universität
University place München
Faculty Fakultät Wissenschaftszentrum Weihenstephan